Interacciones lípido-proteicas del receptor de acetilcolina : nicotínico : /
El receptor de acetilcolina nicotínico (AchR) es el receptor prototipo de la superfamilia de canales iónicos gatillados por ligandos. el AChR es una proteína integral de membrana pentamérica de estequiometría variable que depende del tipo específico de AChR. Numerosos estudios han demostrado que el...
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| Formato: | Libro |
| Idioma: | Spanish |
| Publicado: |
2000.
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| Sumario: | El receptor de acetilcolina nicotínico (AchR) es el receptor prototipo de la superfamilia de canales iónicos gatillados por ligandos. el AChR es una proteína integral de membrana pentamérica de estequiometría variable que depende del tipo específico de AChR. Numerosos estudios han demostrado que el AChR es sumamente sensible al ambiente lipídico. Aunque todavía no se ha establecido con certeza la influencia de la fluidez de membrana sobre la función del recetpr, sí se sabe que la presencia de esteroles y de fosfolípidos negativamente cargados es necesaria para su funcionalidad. El objetivo global de mi trabajo de Tesis fue el de contribuir a la comprensión de la naturaleza y mecanismos por medio de los cuales las interacciones lípido-proteicas modulan algunos procesos biológicos en los cuales está involucrada esta proteína, cuales son su tránsito intracelular asociado a membranas y su organización a nivel de la membrana plasmática. Dentro de esta área, participé en los siguientes subproyectos de investigación: 1)papel de ciertos lípidos endógenos, como fosfatidilserina (PS), colesterol (Chol) y esfingolípidos (SPL) en la expresión y tránsito del AChR en sistemas celulares heterólogos; 2) efectos de xenobióticos lipofílicos como son los pesticidas organoclorados (OP) sobre el AChR; 3) control de la expresión y organización del AChR en sistemas celulares heterólogos. I. INTERACCIONES LÍPIDO-PROTÉICAS DEL AChR: ROL DE CIERTOS LÍPIDOS ENDÓGENOS. Actualmente persisten numerosas cuestiones relacionadas con el papel de los lípidos en la expresión y organización del AChR a nivel de la membrana plasmática, y de su tránsito intracelular. Se estudió mediante microscopía de fluorescencia los posibles efectos de la PS, Chol y SPL sobre el AChR y su tránsito intracelular. Con tal propósito estudiamos la expresión del AChR en sistemas celulares heterólogos crecidos en condiciones de composición li´pídica controlada. Utilizamos fármacos específicos y sistemas celulares defectuosos en vías específicas. En una serie de estudios se transfectaron células PSA-3 (un clon mutante deficiente en la síntesis de PS) en forma estable con los genes del tipo muscular adulto de AChR, obteniéndose un clon (PSA-3/134) con alta y homogénea expresión de AChR. Para determinar los posibles efectos de la depleción/enriquecimiento en PS en el tránstio y expresión en membrana plasmática del AChR, se cultivó este clon en distintas condiciones de cultivo, en paralelo con células normales en el metabolismo de PS. Los cambios de PS no afectaron el nivel total de expresión ni la funcionalidad del AChR, pero sí se observaron cambios en la distribución del AChR en la membrana plasmática. Las células CHO-SPB1/SPH fueron crecidas en condiciones diferentes de cultivo. La expresión del AChR en la superficie celular disminuyó en las células CHO-SPB1/SPH crecidas en la temperatura (T) no permisiva (39ºC). El principal hallazgo fue que las células CHO-SPB1/SPH mostraron una sensible reducción en el nivel de expresión en membrana plasmática del AChR. Además, el contenido interno del AChR fue significativamente mayor en las células CHO-SP1/SPH cuando éstas fueron crecidas en las condiciones de deficiencia en SPL, comprobándose así estudios bioquímicos anteriores de nuestro grupo. Para estudiar los efectos del Chol, se cultivaron células CHO-K1/A5 en presencia de compactina, un inhibidor de la síntesis del Chol. Se observó una caída drástica de la expresión del AChR en la superficie celular, acompañada de un incremento del contenido interno, indicando que el tránsito del receptor hacia la superficie fue inhibido por las condiciones de cultivo deficientes en Chol. En cambio, la depleción aguda del Chol de la membrana plasmática con ciclodextrinas no produjo ningún efecto apreciable. II EFECTOS DE PESTICIDAS ORGANOCLORADOS SOBRE EL AChR. Caracterizamos los efectos de algunos OP sobre varias propiedades biofísicas de membranas nativas ricas en AChR, de sistemas modelo lipídicos y de células, utilizando dos clases de sondas fluorescentes sensibles al ambiente, el Laurdan, y el DPH y sus derivados polares PA-DPH y TMA-DPH. Los valores de polarización generalizada (GP) de excitación de Laurdan, registrados en condiciones de excitación directa o de transferencia de energía (FRET), indicaron que la mayoría de los pesticidas aumentaron la GP. CALIFICACION DEPARTAMENTO DE GRADUADOS Calificación de la defensa oral: Sobresaliente - 10 (diez) Fecha: 28/12/00 |
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| Descripción Física: | 178 h. : il. ; 30 cm. . |
| Bibliografía: | Incluye referencias bibliográficas. |